支原體檢測(cè)的核酸法，已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞支原體篩查和生物制品企業(yè)的生產(chǎn)放行檢測(cè)中。

但在使用PCR方法檢測(cè)支原體之前，由于有些待檢樣品的成分過于復(fù)雜，或含有的某些成分會(huì)抑制PCR反應(yīng)的進(jìn)行，因此需要使用『支原體DNA提取試劑盒』提前做DNA的提取工作。

對(duì)于生物藥或需遵循藥典的樣本，也由于樣品基質(zhì)可能會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度，因此需要樣本做DNA抽提處理，實(shí)現(xiàn)核酸法gao的靈敏度。

這里向您推薦德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒

英文品名：

Venor®GeM Sample Preparation Kit

該試劑盒已經(jīng)過多方廣泛驗(yàn)證，有很多引用文獻(xiàn)；

它已達(dá)到歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)，可用于PCR或qPCR檢測(cè)支原體的方法學(xué)驗(yàn)證。

1

產(chǎn)品信息：

2

產(chǎn)品特點(diǎn)

1）符合歐洲藥典的要求。

2）采用離心管柱的方法，全程只需30分鐘。

2）從細(xì)胞上清和生物制品中，均可分離支原體DNA。

3）洗脫DNA純度高，體積50μl，保證PCR大的靈敏度。

3

操作步驟

四步法：

1）細(xì)胞裂解

2）DNA吸附到核酸純化柱上

3）去除殘留污染物和抑制劑

4）DNA洗脫

試劑盒組分：

Spin columns（核酸純化住）

Collection tubes（收集管）

Conditioner液

Binding Buffer液

Buffer A1液

Buffer A2液

Buffer E液

操作示意圖：

4

所需其他材料及儀器：

• ＞96%無水乙醇
• EP管（1.5ml或2ml）
• 離心機(jī)和恒溫儀（用于1.5ml 或2ml 離心管）
• 移液器及帶濾芯吸頭（100μl 和1000μl）
• 可選：蛋白酶K（貨號(hào)56-0002），用于處理富含蛋白（＞10mg/ml）的樣品。
• 可選：DNA 內(nèi)控對(duì)照，用于配合

Venor®GeM Classic Kit（貨號(hào)11-1025）

以保證操作過程沒有問題。

5

注意事項(xiàng)：

1. 支原體DNA 提取試劑盒一次可從多含有1X 10⁶ 細(xì)胞/ml 的細(xì)胞上清中直接分離DNA。

2. 富含蛋白的樣本（蛋白含量＞10mg/ml）可能需要蛋白酶K 處理后，再抽提DNA。

3. 此試劑盒不適于提取真核細(xì)胞組織的DNA。

4. 若在提取DNA時(shí)加入了內(nèi)控DNA對(duì)照，則在支原體核酸法檢測(cè)時(shí)不需要再加內(nèi)控對(duì)照。我們推薦使用對(duì)照，以驗(yàn)證結(jié)果的可靠性，也有助于排除故障。

5. 不要使用其他酒精來替代乙醇，它將導(dǎo)致核酸產(chǎn)量的下降。

6. 緩沖液E（Buffer E）的預(yù)熱，會(huì)顯著改善核酸的產(chǎn)量。