注意無(wú)菌。無(wú)論哪一管液體，開(kāi)蓋后盡量立即關(guān)上（如果有幾瓶都需要開(kāi)的，也注意，可以虛蓋）。蓋子向上放。操作時(shí)不要從開(kāi)蓋的容器上方經(jīng)過(guò)。另外，無(wú)菌臺(tái)面上擺放的各種東西，最好是一字?jǐn)[開(kāi)，平行于自己。盡量不要前后重疊。

細(xì)胞操作中所用的所有耗材試劑最好都是細(xì)胞培養(yǎng)專(zhuān)用。一般都以一次性耗材居多。1ML槍頭為加長(zhǎng)型專(zhuān)用培養(yǎng)槍頭。移液管亦有專(zhuān)用10mL一次性無(wú)菌移液管

（1）細(xì)胞換液：

培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液，加入新培養(yǎng)液。

（2）細(xì)胞傳代：

傳代之前先觀察，細(xì)胞是否密集，是否開(kāi)始融合。一般融合達(dá)到70－80%就可以傳代。早點(diǎn)傳代也可以。

如果是貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞：

1） 培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液；

2） 無(wú)菌PBS或無(wú)菌生理鹽水洗滌3次（按培養(yǎng)體積加入）；

3） 加入適量胰酶消化適當(dāng)時(shí)間（一般胰酶為0.25%；9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，一次加入1mL胰酶。消化時(shí)間視細(xì)胞類(lèi)型等多種情況綜合考慮，一般如果是細(xì)胞株，非原代培養(yǎng)，消化1－2分鐘足矣）；

4） 用槍頭吹打數(shù)十次（視細(xì)胞類(lèi)型而定。一般細(xì)胞株30－50次吧，耗時(shí)一般2分鐘左右）；

5） 加入適量體積*培養(yǎng)基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，可以加入1mL*培養(yǎng)基；現(xiàn)在培養(yǎng)瓶（皿）里有2mL溶液）。

6） 現(xiàn)在可以將溶液進(jìn)行分瓶（2mL）。如果是細(xì)胞株，直接均分到兩個(gè)培養(yǎng)瓶（皿）里。如果是原代培養(yǎng)，可以根據(jù)消化時(shí)間來(lái)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分離；因此可以將溶液（2mL）都轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶（皿）。

7） 將兩個(gè)培養(yǎng)瓶（皿）補(bǔ)足*培養(yǎng)基到正常體積（果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，為5mL*培養(yǎng)液）

8） 鏡下觀察。剛剛傳代細(xì)胞還沒(méi)貼壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之內(nèi)會(huì)貼壁，如果已經(jīng)貼壁，根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型有不同的形態(tài)，但通常都不是圓形。

9） 鏡下觀察無(wú)誤之后，再放入細(xì)胞培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。

10） 傳代之后，最好第二天細(xì)胞換液一次。當(dāng)然，也可以視情況而定。

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