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維生素測定培養(yǎng)基的試樣處理的順序是怎么樣的

更新時間:2018-12-14  |  點擊率:1473
   維生素測定培養(yǎng)基的試樣處理的順序是怎么樣的
  
  維生素B12測定用培養(yǎng)基,不含維生素B12,但包含所有其他維生素和必要養(yǎng)分,用于萊士曼乳酸桿菌(ATCC7830)的生長。萊士曼乳酸桿菌(ATCC7830)作為測定用菌,zui早由Capp等人描述(1)并被美國藥典和美國分析化學(xué)家協(xié)會(AOAC)所推薦(2,3)。
  
  用已知稀釋度的維生素B12標(biāo)準(zhǔn)品,可以制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(2,3)。
  
  測試菌液的制備是將將活化后的菌株接種到乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基中,推薦在37°C孵育24小時,再離心、清洗、重懸于10ml生理鹽水中,再通過濁度分析或酸度分析,確定生長反應(yīng)。
  
  用維生素B12的濃度及對應(yīng)的吸光度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。用標(biāo)準(zhǔn)曲線可確定待測樣本中的維生素B12的濃度。
  
  維生素測定培養(yǎng)基的操作方法
  
  (1)試樣處理
  
  ①皂化:準(zhǔn)確稱取1~10g試樣(含維生素A約3μg,維生素E各異構(gòu)體約為40μg)于皂化瓶中,加30mL無水乙醇,進(jìn)行攪拌,直到顆粒物分散均勻為止。加入5muO%抗壞血酸、苯并[P]芘標(biāo)準(zhǔn)液2.OOmL,混勻,加10mL氫氧化鉀溶液(1+1),混勻。于沸水浴回流30min,使皂化*。皂化后立即放入冰水中冷卻。
  
 ?、谔崛。簩⒃砘蟮脑嚇右迫敕忠郝┒分?,用50mL水分2~3次洗皂化瓶,洗液并入分液漏斗中,用約100mL乙mi分兩次洗皂化瓶及其殘渣,乙mi液并入分液漏斗中。如有殘渣,可將此液通過有脫脂棉的漏斗濾入分液漏斗中。輕輕搖動分液漏斗2min,靜置分層,棄去水層。
  
  ③洗滌:用約50mL水洗分液漏斗中的乙mi層,用pH試紙檢驗直至水層不顯堿性(初水洗輕搖,逐次振搖強(qiáng)度可增加)。
  
  ④濃縮:將乙mi提取液經(jīng)過無水硫酸鈉(約5g)濾入與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器配套的250~300mL球形蒸發(fā)瓶內(nèi),用約100mL乙mi沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉3次,并入蒸發(fā)瓶內(nèi),并將其接至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上,于55℃水浴中減壓并回收乙mi,待瓶中剩下2mL乙mi時,取下蒸發(fā)瓶,立即用氮氣吹掉乙mi,立即加入2.OOmL乙醇,充分混合,溶解提取物。
  
  將乙醇液移入一小塑料離心管中離心5min(5000r/min)。上清液供色譜分析。如果試樣中維生素含量過少,可用氮氣將乙醇液吹于后,再用乙醇重新定容,并記下體積比。
  
  
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